Timpul de analiză este redus considerabil de la aproximativ o oră la câteva minute prin metoda RTF-EXPAR recent raportată, care utilizează abordarea fără transcriptază inversă (RTF) pentru conversia ARN în ADN-ul urmată de EXPAR (Exponential Amplification Reaction) pentru amplificare la o singură temperatură.
Controlul ratei de Covid-19 răspândirea necesită o strategie de testare a virusului precisă și mai rapidă. RT-PCR (reacția în lanț a polimerazei cu transcriptază inversă), cea mai precisă metodă de testare utilizată în prezent este un test în două etape care durează aproximativ 60 de minute per probă.
Cercetătorii de la Universitatea din Birmingham au raportat o nouă metodă de detectare a SARS-CoV-2. Acest lucru ar putea permite testarea mult mai rapidă și este suficient de sensibil.
Detectarea ARN viral de către RT-PCR (reacția în lanț a polimerazei cu transcriptază inversă) implică conversia ARN viral în ADN complementar (ADNc) urmată de amplificarea ADNc printr-o PCR cantitativă (qPCR). ADNc-ul este apoi detectat folosind un colorant fluorescent. Acest lucru durează până la o oră.
Timpul de analiză este redus considerabil de la aproximativ o oră la câteva minute prin metoda RTF-EXPAR recent raportată, care utilizează abordarea fără transcriptază inversă (RTF) pentru conversia ARN-ului în ADN-ul urmată de EXPAR (Exponential Amplification Reaction) pentru amplificare la o singură temperatură. Amplificarea care are loc la o singură temperatură este cheia vitezei, deoarece evită etapele lungi de încălzire și răcire ale RT-PCR. În plus, secțiunea de ADN care este amplificată este mai mică în comparație cu RT-PCR. Prin urmare, EXPAR generează până la 108 catene de produs ADN în câteva minute. Formarea duplexului este monitorizată, ca în metoda RT-PCR folosind colorant fluorescent, SYBR Green.
Interesant este că noua metodă poate fi modificată pentru a detecta alte câteva boli infecțioase cauzate de virusurile ARN, de exemplu Ebola, RSV etc.
Sursa (e):
Carter și colab. (2020). Detectarea sub 5 minute a ARN-ului SARS-CoV-2 folosind o reacție de amplificare exponențială fără transcriptază inversă, RTF-EXPAR. Pretipărire. Publicat la medRxiv Postat 04 ianuarie 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
